水产品中孔雀石绿检测的固相萃取方法

一、样品提取 

准确称取鱼肉样品5.0g于50mL离心管1中，加入 1.5  mL 20%的盐酸羟胺，2.5mL 1.0mol/L的对甲苯磺酸溶液，5.0 mL乙酸钠-对甲苯磺酸缓冲液（4.95 g 无水乙酸钠及0.95g对-甲苯磺酸于950ml 水中，用乙酸调 pH至4.5，用水定容至1L），匀浆机均质 30s（10000 r/min）。加入10mL乙腈，剧烈振摇 30s。加入 5g酸性氧化铝， 震荡30s。离心机离心 10 min（3000 r/min）,取上清液 转移至预先加好 10 mL 水、2 mL 二甘醇的离心管2中。加入10mL乙腈至离心管 1 中，重复上述提取一次，合并乙腈层。 离心管2中加入15mL二氯甲烷，振荡10s，离心10min（3000 r/min），取二氯甲烷层于梨形瓶中。继续用5mL乙腈、10mL二氯甲烷重复上述提取一次，合并两次提取的二氯甲烷层。将提取液45℃旋转蒸发至1mL，再用2.5mL乙腈溶解，待净化。 

二、SPE 柱净化（酸性氧化铝，1000mg/3ml） 

活化：酸性氧化铝固相萃取柱使用前用5mL乙腈活化。 

上样和洗脱：将梨形瓶中的待净化液转移至柱中净化， 梨形瓶使用2.5mL×2的乙腈洗涤瓶两次，把洗涤液依次通过柱子，整个上样过程保持流速不超过0.6mL/min， 收集全部流出液。 

重新溶解：流出液45℃氮吹至近干，用1mL乙腈定 容，过0.45μm滤膜，待上机测试。 

三、仪器条件 

设备：Agilent Technologies 1200Series 

色谱柱：C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 

检测器：紫外检测器 

检测波长：618 nm 

流动相：A：乙腈       B：0.05 mol/L 乙酸铵缓冲溶液

流速：1.2 mL/min 

进样体积：50ul 

洗脱方式：梯度洗脱

四、实验结果