牛奶中三聚氰胺检测的固相萃取方法

《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》

一、样品提取

称取 2.0 ｇ牛奶 ( 精确至 0.01 g) 于 50 mL 离心管中，加入15 mL 1% 三氯乙酸溶液和 5 mL 乙腈，超声提取 10 min，再振荡提取 10 min，4000 r/min 离心 10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至 25 mL，移取 5 mL 滤液，加入 5 mL 水混匀后做待净化液。

二、SPE 柱净化（MCX，60 mg/3 mL）

活化：使用前依次用 3 mL 甲醇、5 mL 水活化柱子。

上样和洗脱：将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3 mL 水、3 mL 甲醇洗涤，抽至近干后，用 6 mL 5% 氨

化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过 1 mL/min。

重新溶解：洗脱液于 50℃下用氮气吹干，残留物用 1 mL 流动相定容，涡旋混合 1 min，过微孔滤膜后，供 HPLC 测定。

三、标准曲线溶液的制备

取适宜浓度的标准品，用流动相配制成上机浓度分别为1 μg/mL，2 μg/ mL，5 μg/ mL，10μg/ mL的标点，得到标准曲线。

四、仪器条件

设备：Agilent Technologies 1200Series

色谱柱： C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm)

检测器：紫外检测器

检测波长：240 nm

流动相：A：离子对试剂缓冲液 ( 准确称取 2.10 g 柠檬酸和2.16 g 辛烷磺酸钠，加入约 980 mL 水溶解，调节 PH 至 3.0后，定溶至 1 L 备用 )      B：乙腈。

洗脱方式：等度洗脱，A: B=80: 20

柱温：室温

流速：1 mL/min

进样体积：20 µL

进样时间：10min

五、实验结果

表1 添加浓度5μg/ml三聚氰胺的添加回收结果

                                   图1 5μg/ml三聚氰胺标准品液相色谱图                                                         图2 添加浓度5μg/ml三聚氰胺液相色谱图

                                        图3 三聚氰胺标准曲线