人参中的人参皂苷Re检测的固相萃取方法

一、样品提取

准确称取人参粉末0.2g于2 mL离心管中加入甲醇1mL；涡旋1 min分散均匀；超声5min，12000r/min离心5min。取上清液，重复提取5次，混合上清液；40℃氮吹至干，4 mL水超声溶解，备用。

二、SPE 柱净化（C18固相萃取柱，500 mg/6 mL）

活化：C18固相萃取柱使用前用5 mL甲醇、5 mL 水活化。

上样和洗脱：往固相萃取柱中加入提取备用液，弃去流出液；加入5 mL水淋洗，弃去淋洗液；抽干。5 mL15%乙腈水溶液洗脱，收集洗脱液。（整个上样淋洗洗脱过程中流速保持1 mL/min）。

上机测试：洗脱液取1 mL，0.22 um滤膜过滤，供HPLC上样测试。

三、标准曲线溶液的制备

取适宜浓度的标准品，配制成上机浓度分别为2 μg/mL，5μg/mL，10 μg/mL，20μg/mL的标点，得到标准曲线。

四、仪器条件

设备：Agilent Technologies 1200Series

色谱柱：C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm)

检测器：紫外检测器

检测波长：203nm

流动相：A：乙腈

B：0.025 mol/L磷酸二氢钾

洗脱方式：梯度洗脱

流速：1.0mL/min

进样体积：20 µL

表1 梯度洗脱条件

五、实验结果

表2 添加浓度10μg/ml人参皂苷Re的添加回收结果

                                图1人参皂苷Re标准品液相色谱图                                                                    图2 人参皂苷Re标准曲线