酸奶中的柠檬酸检测的固相萃取方法

一、样品提取

准确移取酸奶5.0g于50mL离心管中加入水至50mL涡旋1min分散均匀。4500r/min离心10min。取上清液5mL，备用。

二、SPE 柱净化（SAX，1000 mg/6 mL）

活化：SAX固相萃取柱使用前用6mL甲醇、6mL水活化。

上样和洗脱：往固相萃取柱中加入提取备用液，弃去流出液；加入5mL水淋洗，弃去淋洗液；2mL固相萃取柱洗脱液（6%盐酸 -水溶液）洗脱，收集洗脱液。（整个上样淋洗洗脱过程中流速保持 <1 mL/min）

重新定容：洗脱液定容至2mL，0.22µm滤膜过滤，供HPLC上样测试。

三、标准曲线溶液的制备

取适宜浓度的标准品，用流动相配制成上机浓度分别为20μg/mL，40μg/ mL，80μg/ mL，200μg/ mL，360μg/ mL的标点，得到标准曲线。

四、仪器条件

设备：Agilent Technologies 1200Series

色谱柱： C18 (4.6mm×250mm, 5µm)

检测器：紫外检测器

检测波长：214nm

流动相：A：甲醇      B：0.025mol/L磷酸二氢钾（PH=2.5）

洗脱方式：等度洗脱，A: B=5: 95

柱温：室温

流速：1mL/min

进样体积：20µL

进样时间：10min

五、实验结果

表1 0.2mg/g柠檬酸的添加回收结果