牛奶中苯甲酸检测的固相萃取方法

《GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 高效液相色谱法》

一、样品提取

准确称取牛奶10 g于50 ml离心管中，加入0.25 mol/L的亚铁氰化钾溶液2 ml，摇匀，再加入1 mol/L的乙酸锌溶液2ml，摇匀，4000 r/min 离心10min。上清液待净化。

二、SPE 柱净化（MAX，60 mg/3 mL）

活化：MAX固相萃取柱使用前用3ml甲醇、3ml水活化。

上样和洗脱：在MAX固相萃取柱上加入5ml备用样液，弃去流出液。用3ml 2%氨水-水溶液、3ml甲醇淋洗，弃去淋洗液；抽干小柱；用2ml 5%甲酸-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速 1 ml/min）。重新溶解：洗脱液过0.45 µm 滤膜，上机测试。

三、标准曲线溶液的制备

取适宜浓度的标准品，用水配制成上机浓度分别为10ug/ml、20ug/ml、50ug/ml、100ug/ml的标点，得到标准曲线。

四、仪器条件

设备：Agilent Technologies 1200Series

色谱柱：C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm)

检测器：紫外检测器

检测波长：230 nm

流动相：A：乙腈     B：磷酸盐缓冲溶液（分别称取 2.5 g磷酸二氢钾和磷酸氢二钾，加水溶解定容到 1000 ml）

洗脱方式：等度洗脱，A: B=10: 90

柱温：室温

流速：1.0 mL/min

进样体积：20 µL

进样时间：12min

五、实验结果

表1 0.1mg苯甲酸的添加回收结果

                                     图1 甲酸-甲醇溶液液相色谱图                                                                  图2 50μg/ml苯甲酸标准品液相色谱图

                                  图3 添加量0.1mg苯甲酸液相色谱图                                                                       图4 苯甲酸标准曲线