《GB5009.35-2023 食品中合成着色剂的检测》

一、样品提取

准确称取试样2g(精确至0.001g)，置于50ml离心管中，加入适量乙醇氨水溶液，涡旋1min，5000r/min离心5min，并用乙醇氨水溶液定容至50ml，即得提取液;准确吸取上清液10ml，50℃下氮气浓缩至3ml左右，分2次~3次共加入10ml 5%甲醇水溶液溶解，调节PH=6.0，作为待净化液。

二、SPE 柱净化（WAX，150mg/6ml）

活化：依次用6ml甲醇和6ml水活化WAX固相萃取柱，保持柱体湿润。

上样：将上述待净化液以2-3s/滴的流速加载到固相萃取柱上，弃掉流出液。

淋洗：依次用6ml 2%甲酸水溶液和6ml甲醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，真空抽2min至柱体近干。

洗脱：用6ml 2%氨化甲醇溶液洗脱，分两次加入，每次3ml，流速低于2-3s 1滴，收集洗脱液，定容至5ml，过滤，待测。

三、标准曲线溶液的制备

用水配置 0.4μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL 合成色素混标。

四、仪器条件

设备：Agilent Technologies 1200Series

色谱柱：C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm)

检测器：二极管阵列检测器

检测波长：415nm，520nm，610nm

流动相：A：20 mmol/L乙酸铵溶液    B：甲醇

洗脱方式：梯度洗脱

柱温：30℃

流速：1 mL/min

进样体积：10 µL

表1 梯度洗脱条件

五、实验结果

表2 合成着色剂加标回收率结果

                            图1 2μg/ml-415nm液相色谱图

                            图2 2μg/ml-520nm液相色谱图

                            图3 2μg/ml-610nm液相色谱图